酵母菌计数

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血球计数板被用以对人体内红、白血球进行显微计数之用，也常用于计算一些细菌、真菌、酵母等微生物的数量，是一种常见的生物学工具。1视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释(斜面一般稀释100倍)，以每小格的菌数可数为度。

2.取洁净的血球计数板一块，在计某某上盖上一块盖某某。

3.将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖某某的下边缘滴入一小滴(不宜过多)，让菌悬液利用液体的表面张力充满计某某，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。4.静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计某某后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。

5.计数时若计某某是由16个中方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个中方格(即100小格)的菌数。如果是25个中方格组成的计某某，除数上述四个中方格外，还需数中央1个中方格的菌数(即80个小格)。16×25型的计数板??它含16中格，每个中方格又分成25个小方格。一般取四角四个中方格（100个小方格）计数。计数重复3次，取其平均值。计数完毕后，依下列公式计算：

酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/?100 ×400×10000×稀释倍数

25×16型的计数板??它含25个中方格，每个中方格又分成16个小方格。一般计数四个角和中央的五个中方格（80个小方格）的细胞数。计数重复3次，取其平均值。计数完毕后，依下列公式计算：

酵母细胞个数／1mL?＝80个小方格细胞总数/?80 ×400×10000×稀释倍数

6.对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2-3次(每次数值不应相差过大，否则应重新操作)，按公式计算出每mL(g)菌悬液所含细胞数量。

7.测数完毕，取下盖某某，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。

注意：《培养液中酵母菌种群数量的动态变化》实验是一个历时较长（7天左右）的实验，事前一定要做好周密的计划，定程序、定时间、定人员。每天采用抽样检测法使用血球计数板对酵母菌进行计数，在计数时应从以下几方面注意。

每天同一时间，各组取出本组的试管，用血球计数板计数酵母菌个数，并作记录，连续观察7天。

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